什么是質粒轉化?如何操作呢?

一、基本原理

將質粒 DNA 導入細菌的過程稱為轉化（ Transformation ）。此感受態細菌細胞在 CaCl 2 低滲溶液中膨脹為球狀（感受態細菌的制備，見前）。質粒 DNA 與 CaCl 2 形成抗 DNase 羥基 - 磷酸鈣復合物黏附于細菌表面，經 42℃ 短時間熱沖擊處理，促進細胞吸收 DNA 復合物。在豐富培養基上生長數小時后，球狀細胞復原并分lie增殖。被轉化的細菌中，外源基因得到表達。在選擇性培養平板上，可選出所需的轉化子（即含有質粒 DNA 的細菌）。鈣處理的感受態細胞，一般每微克 DNA 能獲得 10 5 ～ 10 6 個轉化子。除化學方法轉化細菌外，還有電穿孔法（ Electroporation ），其轉化率可高達 10 9 ～ 10 10 個轉化子 /μg 質粒 DNA 。


二、實驗器材

1.培養皿 

2.恒溫培養箱


三、試劑

1.LB 培養基

2.選擇性 LB 瓊脂培養平板（含氨芐青霉素，終濃度為 50μg/ml ）

3.氨芐青霉素 100 mg/ml

4.宿主細菌：經 100 mmol/L CaCl 2 處理的感受態細菌 DH5α


四、操作步驟

1、取50μL大腸桿菌感受態細胞，加入適量質粒（體積不得超過4μL）冰浴30min后42℃熱激90s ，馬上放回冰上，冰浴2min ；

2、加400μLLB培養基，于37℃搖床慢搖振蕩培養45-60min；

3、取50-100μL涂在含有氨芐青霉素（100μg/mL）的LB固體培養基上，37℃倒置培養過夜。

 

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