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ELISA實(shí)驗(yàn)試劑解析

  • 發(fā)布日期:2022-06-21      瀏覽次數(shù):1414
    • 在ELISA實(shí)驗(yàn)中有三個(gè)必要的試劑:免疫吸附劑、結(jié)合物和酶的底物等。完整的ELISA試劑盒包含以下各組分:

      (1)已包被抗原或抗體的固相載體(免疫吸附劑);

      (2)酶標(biāo)記的抗原或抗體(結(jié)合物);

      (3)酶的底物;

      (4)陰性對(duì)照品和陽性對(duì)照品(定性測定中),參考標(biāo)準(zhǔn)品和控制血清(定量測定中);

      (5)酶聯(lián)物(結(jié)合物)及標(biāo)本的稀釋液;

      (6)洗滌液;

      (7)酶反應(yīng)終止液。


      1.免疫吸附劑

        已包被抗原或抗體的固相載體在低溫(2~8℃)干燥的條件下一般可保存6個(gè)月以上。有些不完整的試盒,僅供應(yīng)包被用抗原或抗體,檢測人員需自行包被。以下簡述固相載體和包被過程。

      2.固相載體

        固相載體在ELISA測定過程中作為吸附劑和容器,不參與化學(xué)反應(yīng)??勺鱁LISA中載體的材料很多,常用的是聚苯乙烯。聚苯乙烯具有較強(qiáng)的吸附蛋白質(zhì)的性能,抗體或蛋白質(zhì)抗原吸附其上后仍保留原來的免疫學(xué)活性,加之它的價(jià)格低廉,所以被普遍采用。聚苯乙烯為塑料,可制成各種形式。


        ELISA載體的形狀主要有三種:微量滴定板、小珠和小試管。以微量滴定板為常用,專用于EILSA的產(chǎn)品稱為ELISA板,上標(biāo)準(zhǔn)的微量滴定板為8×12的96孔式。為便于作少量標(biāo)本的檢測,有制成8聯(lián)孔條或12聯(lián)孔條的,放入座架后,大小與標(biāo)準(zhǔn)ELISA板相同。ELISA板的特點(diǎn)是可以同時(shí)進(jìn)行大量標(biāo)本的檢測,并可在特制的比色計(jì)上迅速讀出結(jié)果。現(xiàn)在已有多種自動(dòng)化儀器用于微量滴定板型的ELISA檢測,包括加樣、洗滌、保溫、比色等步驟,對(duì)操作的標(biāo)準(zhǔn)化極為有利。聚苯乙烯經(jīng)射線照射后,其吸附性能特別是對(duì)免疫球蛋白的吸附性能增加,應(yīng)用于雙抗體夾心法可使固相上抗體量增多,但用于間接法測抗體時(shí)空白值較大。

        良好的ELISA板應(yīng)該是吸附性能好,空白值低,孔底透明度高,各板之間、同一板各孔之間、同一板各孔之間性能相近。聚苯乙烯ELISA板由于原料的不同和制作工藝的差別,各種產(chǎn)品的質(zhì)量差異很大,因此,每一批號(hào)的ELISA板在使用前須事先檢查其性能。常用的檢查方法為:以一定濃度的人IgG(一般為10ng/ml)包被ELISA板各孔,洗滌后每孔內(nèi)加入適當(dāng)稀釋度的酶標(biāo)抗人IgG抗體,保溫后洗滌,加底物顯色,終止酶反應(yīng)后,分別測每孔溶液的吸光度??刂品磻?yīng)條件,使各孔讀數(shù)在吸光度0.8左右。計(jì)算全部讀數(shù)的平均值。所有單個(gè)讀數(shù)與全部讀數(shù)的均數(shù)之差,應(yīng)小于10%。


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