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ELISA試劑盒常見問題解析

  • 發布日期:2015-06-23      瀏覽次數:1073
    •                                                        ELISA試劑盒問題解析
          設計ELISA復孔檢查時,是對同一個樣品作兩次稀釋,再分別加到板上的兩個孔,還是只稀釋一次,然后吸取兩次分別加到兩個孔?前者似乎把稀釋時的誤差也考慮到了,但做出來的結果兩個孔相關挺大的。而較常使用的是哪種稀釋方法?
          為了減小誤差,是先稀釋再加樣。而針對這位客戶所遇到的疑問,我公司技術人員是這樣解說的:
          1. 前者測的是稀釋和移液的誤差,后者只有移液誤差。
          2. 一般都是稀釋一次,分兩孔吧。同濃度的分復孔。
          3. 由于是從同一原液稀釋,一般不考慮稀釋誤差(稀釋誤差是存在的),都是稀釋到想要的倍數直接分孔(而不是一一稀釋,這樣可以使稀釋誤差減小)。
          4. 復孔是為了排除移液體積,板的影響,以及其他系統誤差的,要求復孔的濃度是一致的。稀釋后分孔能滿足此要求,一一稀釋不能。

      ELISA操作技巧
          1.操作前應對實驗的物理參數有充分的了解,如環境溫度(保持在18 C~25℃)、反應孵育溫度和孵育時間、洗滌的次數等,要先查看水育箱溫度,ELISA試劑盒是否符合要求。
          2.正確使用加樣器加樣器應垂直加入標本或試劑,避免刮擦包被板底部。加樣過程中避免液體外濺,血清殘留在反應孔壁上,加樣器吸頭要清洗干凈,避免污染,加樣次序要與說明書一致,否則可導致結果錯誤,實驗重復性差。
          3.手工洗板加洗液時沖擊力不要太大,洗滌次數不要超過說明書推薦的洗滌次數,洗液在反應孑L內滯留的時間不宜太長。不要使洗液在孑L間竄流,造成孔問污染,導致假陰性或假陽性。
          4.要保證加液量一致 我們在使用時感覺滴瓶加液不如加樣器好,滴瓶不易控制加液量不準,造成顯色不統一,判斷錯誤。
          5.顯色液量不可過多 加樣的工作環境不能處于陽光直射的環境下,加顯色系統后要避光反應,顯色液量不能過多,以免顯色過強。


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